Mutagénicité et Génotoxicité | OCDE 487

Le test in vitro de micronoyaux sur cellules de mammifères (test MN, OCDE TG 487) constitue un pilier de la plupart des stratégies réglementaires en matière d'essais de génotoxicité. Il est largement utilisé pour identifier les substances responsables de lésions chromosomiques, en mettant en évidence à la fois les effets clastogènes (rupture chromosomique) et les effets aneugéniques (altérations du nombre de chromosomes).

Pour approfondir l'étude du mode d'action, il est possible de recourir à la coloration des centromères à l'aide de sondes d'hybridation in situ fluorescente (FISH). Cela permet de différencier les mécanismes clastogènes et aneugéniques, comme l'exige le règlement REACH lorsque le nombre de micronoyaux est accru dans le test MN.

Des adaptations spécifiques de cette ligne directrice sont nécessaires pour les essais sur les nanomatériaux. La démonstration de l'absorption cellulaire et la confirmation d'une exposition effective sont cruciales pour obtenir des résultats scientifiquement solides. L'exposition devrait idéalement se faire dans une dispersion stable.

Principe de l'essai

L'essai in vitro du micronoyau évalue la formation de micronoyaux dans des cellules en interphase. Ces micronoyaux peuvent provenir :

•    de fragments de chromosomes acentriques (dépourvus de centromère), ou

•    de chromosomes entiers qui ne se séparent pas correctement pendant l'anaphase

Le test évalue le potentiel d'une substance à induire des dommages génétiques dans des cellules ayant subi au moins un cycle de division cellulaire pendant ou après l'exposition.

Portée du test

La première expérience sera réalisée avec une exposition de courte durée, avec et sans activation métabolique. Si le résultat est négatif ou non concluant, une deuxième expérience modifiée doit être effectuée : exposition prolongée sans activation métabolique ou exposition de courte durée et concentration accrue de S9 (avec activation métabolique). Une analyse de la formulation est possible.

Système d'essai

TK6 CRL8015 TM (lignée cellulaire de lymphoblastes humains isolés de la rate)

Critère d'évaluation

Le potentiel génotoxique d'une substance est déterminé en comparant le taux de micronoyaux observé pour chaque concentration testée à celui d'un témoin négatif (solvant seul). En cas de résultat positif (génotoxique), une analyse FISH complémentaire peut alors être réalisée afin de distinguer le mode d'action en cause (clastogène ou aneugène).

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